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SNP位点筛查服务

一、实验流程

单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNPs),即指由于单个核苷酸碱基的改变而导致的核酸序列的多态性,其形成的遗传标记,数量很多,多态性丰富。这种变异可能是转换(C←→T,在其互补链上则为G←→A)(一个嘌呤碱基被另一个嘌呤碱基替换,或一个嘧啶碱基被另一个嘧啶碱基替换),也可能是颠换(C←→A,G←→T,C←→G,A←→T)(一个嘌呤碱基被一个嘧啶碱基替换,或一个嘧啶碱基被一个嘌呤碱基替换),而转换引起的突变占了SNP的2/3。

以下以SNP检测的“金标准”——Sanger测序为例介绍

二、实验流程

三、展示结果

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DNA甲基化(BSP)服务

一、实验原理

重亚硫酸盐测序法(Bisulphite  Sequencing PCR,BSP)是经重亚硫酸氢盐处理将DNA序列中未甲基化的C碱基脱氨基转化成U碱基,在第一轮PCR扩增中与A碱基配对,则在后续扩增及测序时该位点被检测为T碱基,而甲基化的C碱基则不发生转化,使得该位点的测序结果与模板一致。经过BSP特异性引物扩增U转化为T,最后测序结果未被甲基化的C为T,甲基化的C为C。

二、实验流程

三、结果展示


测序碱基序列

甲基化位点测序峰图


四、服务说明

  • 送样类型:DNA、组织、血液,其他
  • DNA :建议浓度 ≥ 50 ng/µL ,总量 ≥ 10µL ,2.0≥OD260/OD280≥1.8 
  • 组织:≥300mg,黄豆大小,组织最好是新鲜(-80℃保存),也可以是95%乙醇中固定的组织 ,干冰寄送
  • 血液:新鲜血液,体积 ≥ 0.5 mL,需用EDTA抗凝剂抗凝,送样过程中请注意保持低温,防止DNA降解
  • 所有样品建议干冰寄送,至少冰袋运输,保持低温,保证样品质量

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全基因合成

一、实验原理

全基因合成就是依照基因序列,设计全长引物,利用OVERLAP方法形成模版DNA,再利用PCR扩增的方法得到双链DNA,然后将PCR产物转化克隆至克隆载体或者表达载体中。

二、实验流程

1.设计Oligo合成方案,在全自动合成仪器上进行单链的化学合成;

2.通过OVER-LAP的PCR,把单链Oligo拼接成双链的全长基因;

3.将PCR产物酶切、纯化,连接到质粒中,将质粒转入细胞株培养;

4.提取阳性克隆进行DNA测序,确认插入片段的准确性;

5.提供实验报告,包括装载目的基因的质粒、细菌株、测序图谱。

三、特色服务

1.免费提供基因的参考设计方案,包括设计酶切位点,密码子优化等;

2.基因合成周期短,严格按照与用户签定的基因合成服务协议和保密合同执行;

3.能合成长度达 10 kb 的基因;

4.基因克隆到用户指定或提供的表达载体上;

5.质量可靠,提供 DNA 测序结果,保证所合成的基因序列 100% 准确。

四、服务说明

  • 请将您需要合成的基因全序列以 E-mail 或传真的形式告知公司的业务员或公司的技术员。
  • 请说明实验的具体要求,如:使用何种酶切位点进行克隆以及需克隆于何种载体等。
  • 测序结果如果发现有错误位点,我们会采取相应的技术手段进行修复校对,保证整个序列的正确性。
  • 提供实验结果:包括实验操作规程、测序结果、测序彩色峰图、含有合成基因的质粒及含该质粒的菌体( 穿刺菌 )等。

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相对荧光定量PCR服务

一、简介

荧光定量PCR(Real-Time PCR)技术,即是在PCR反应体系中加入荧光物质,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,对未知模板进行定量分析的方法。具有应用范围广、灵敏度高、操作简便、特异性和可靠性更强、自动化程度高、无污染性、具实时性和准确性等特点。

二、实验流程:

三、结果展示:

提供结果:qPCR原始数据、分析数据、融解曲线、扩增曲线、结题报告

qPCR下机原始数据
注:如果融解曲线有双峰,则说明引物存在非特异性扩增

四、服务说明

  • 送样要求:组织、菌体、土壤、其他
  • 组织:每个样品重量 ≥ 300 mg,黄豆大小,组织最好是新鲜(-80℃保存),也可以是95%乙醇中固定的组织 ,干冰寄送
  • 菌体:重量≥ 300 mg,菌体离心到管底,吸出上清液,液氮速冻,干冰寄送DNA、RNA建议浓度 ≥ 100 ng/µL,总量 ≥ 6 µg,2.0≥OD260/OD280≥1.8
  • 土壤:干冰寄送cDNA提供结果包括:qPCR原始数据、分析数据、融解曲线、扩增曲线、结题报告

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物种鉴定

一、实验原理

DNA条形码分子鉴定法是利用基因组中一段公认的、相对较短的DNA序列来进行物种鉴定的一种分子生物学技术,是传统形态鉴别方法的有效补充。

鉴定基因的选择

动物:线粒体细胞色素C氧化酶亚基COI基因,长度约650bp;

植物:ITS序列,长度600-700bp;

细菌:16S全长序列,约1400bp;

真菌:ITS序列,长度在30-1000bp;

酵母:26S部分序列,长度500-600bp;

二、服务流程

PCR测序是SNP分型的金标准,直接对需要检测的位点进行扩增后测序,通过PCR测序法进行SNP分型检出率几乎为100%。纯合型SNP位点的测序峰图为单一峰型,杂合型SNP位点的测序峰图为套峰。

实验流程

三、服务内容

标准服务:提供比对结果及实验方法报告一份,测序结果一份;

升级服务:序列上传,系统发育树构建

系统发育树示例:

四、送样说明

DNA:建议浓度 ≥ 50ng/µL ,总量 ≥ 10µL,2.0≥OD260/OD280≥1.8;

组织:总量≥ 300mg(黄豆大小),组织最好是新鲜组织(-80℃保存),干冰

寄送:也可以是98%乙醇固定,常温寄送。

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