SNP位点筛查服务

一、实验流程

单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNPs），即指由于单个核苷酸碱基的改变而导致的核酸序列的多态性，其形成的遗传标记，数量很多，多态性丰富。这种变异可能是转换(C←→T，在其互补链上则为G←→A)（一个嘌呤碱基被另一个嘌呤碱基替换，或一个嘧啶碱基被另一个嘧啶碱基替换），也可能是颠换(C←→A，G←→T，C←→G，A←→T)（一个嘌呤碱基被一个嘧啶碱基替换，或一个嘧啶碱基被一个嘌呤碱基替换），而转换引起的突变占了SNP的2/3。

以下以SNP检测的“金标准”——Sanger测序为例介绍

二、实验流程

三、展示结果

DNA甲基化（BSP）服务

一、实验原理

重亚硫酸盐测序法（Bisulphite  Sequencing PCR,BSP）是经重亚硫酸氢盐处理将DNA序列中未甲基化的C碱基脱氨基转化成U碱基，在第一轮PCR扩增中与A碱基配对，则在后续扩增及测序时该位点被检测为T碱基，而甲基化的C碱基则不发生转化，使得该位点的测序结果与模板一致。经过BSP特异性引物扩增U转化为T，最后测序结果未被甲基化的C为T，甲基化的C为C。

二、实验流程

三、结果展示

测序碱基序列

甲基化位点测序峰图

四、服务说明

• 送样类型：DNA、组织、血液，其他
• DNA ：建议浓度 ≥ 50 ng/µL ，总量 ≥ 10µL ，2.0≥OD260/OD280≥1.8 
• 组织：≥300mg，黄豆大小，组织最好是新鲜（－80℃保存），也可以是95%乙醇中固定的组织 ，干冰寄送
• 血液：新鲜血液，体积 ≥ 0.5 mL，需用EDTA抗凝剂抗凝，送样过程中请注意保持低温，防止DNA降解
• 所有样品建议干冰寄送，至少冰袋运输，保持低温，保证样品质量

全基因合成

一、实验原理

全基因合成就是依照基因序列，设计全长引物，利用OVERLAP方法形成模版DNA，再利用PCR扩增的方法得到双链DNA，然后将PCR产物转化克隆至克隆载体或者表达载体中。

二、实验流程

1.设计Oligo合成方案，在全自动合成仪器上进行单链的化学合成；

2.通过OVER-LAP的PCR，把单链Oligo拼接成双链的全长基因；

3.将PCR产物酶切、纯化，连接到质粒中，将质粒转入细胞株培养；

4.提取阳性克隆进行DNA测序，确认插入片段的准确性；

5.提供实验报告，包括装载目的基因的质粒、细菌株、测序图谱。

三、特色服务

1.免费提供基因的参考设计方案，包括设计酶切位点，密码子优化等；

2.基因合成周期短，严格按照与用户签定的基因合成服务协议和保密合同执行；

3.能合成长度达 10 kb 的基因；

4.基因克隆到用户指定或提供的表达载体上；

5.质量可靠，提供 DNA 测序结果，保证所合成的基因序列 100% 准确。

四、服务说明

• 请将您需要合成的基因全序列以 E-mail 或传真的形式告知公司的业务员或公司的技术员。
• 请说明实验的具体要求，如：使用何种酶切位点进行克隆以及需克隆于何种载体等。
• 测序结果如果发现有错误位点，我们会采取相应的技术手段进行修复校对，保证整个序列的正确性。
• 提供实验结果：包括实验操作规程、测序结果、测序彩色峰图、含有合成基因的质粒及含该质粒的菌体( 穿刺菌 )等。

相对荧光定量PCR服务

一、简介

荧光定量PCR(Real-Time PCR)技术，即是在PCR反应体系中加入荧光物质，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，对未知模板进行定量分析的方法。具有应用范围广、灵敏度高、操作简便、特异性和可靠性更强、自动化程度高、无污染性、具实时性和准确性等特点。

二、实验流程：

三、结果展示：

提供结果：qPCR原始数据、分析数据、融解曲线、扩增曲线、结题报告

qPCR下机原始数据

注：如果融解曲线有双峰，则说明引物存在非特异性扩增

四、服务说明

• 送样要求：组织、菌体、土壤、其他
• 组织：每个样品重量 ≥ 300 mg，黄豆大小，组织最好是新鲜（－80℃保存），也可以是95%乙醇中固定的组织 ，干冰寄送
• 菌体：重量≥ 300 mg，菌体离心到管底，吸出上清液，液氮速冻，干冰寄送DNA、RNA建议浓度 ≥ 100 ng/µL，总量 ≥ 6 µg，2.0≥OD260/OD280≥1.8
• 土壤：干冰寄送cDNA提供结果包括：qPCR原始数据、分析数据、融解曲线、扩增曲线、结题报告

物种鉴定

一、实验原理

DNA条形码分子鉴定法是利用基因组中一段公认的、相对较短的DNA序列来进行物种鉴定的一种分子生物学技术，是传统形态鉴别方法的有效补充。

动物：线粒体细胞色素C氧化酶亚基COI基因，长度约650bp;

植物：ITS序列，长度600-700bp;

细菌：16S全长序列，约1400bp;

真菌：ITS序列，长度在30-1000bp;

酵母：26S部分序列，长度500-600bp;

二、服务流程

PCR测序是SNP分型的金标准，直接对需要检测的位点进行扩增后测序，通过PCR测序法进行SNP分型检出率几乎为100%。纯合型SNP位点的测序峰图为单一峰型，杂合型SNP位点的测序峰图为套峰。

实验流程

三、服务内容

标准服务：提供比对结果及实验方法报告一份，测序结果一份；

升级服务：序列上传，系统发育树构建

系统发育树示例：

四、送样说明

DNA：建议浓度 ≥ 50ng/µL ，总量 ≥ 10µL，2.0≥OD260/OD280≥1.8；

组织：总量≥ 300mg（黄豆大小），组织最好是新鲜组织（-80℃保存），干冰

寄送:也可以是98%乙醇固定，常温寄送。